續接上文：《歐洲實(shí)驗動(dòng)物科學(xué)協(xié)會(huì )聯(lián)合會(huì )在科研和教學(xué)中使用農場(chǎng)動(dòng)物的健康管理建議（上）》

（b）：病原體篩查

由于農場(chǎng)環(huán)境及操作的開(kāi)放性，病毒、細菌、真菌、體內和體外寄生蟲(chóng)都可能出現在農場(chǎng)環(huán)境中，不可能完全阻止這些生物的入侵。研究人員必須考慮要求動(dòng)物排除哪些傳染性病原體的感染。如上所述，任何有臨床疾病癥狀史的動(dòng)物都不會(huì )被用于研究，因此所有的個(gè)體篩查都將確保動(dòng)物不存在亞臨床感染/疾病。因為所有的感染，無(wú)論是臨床的還是亞臨床的，都會(huì )導致動(dòng)物生理學(xué)變化。此外，正常的微生物菌群及其變化可能會(huì )影響動(dòng)物模型的表型。因此，農場(chǎng)應告知動(dòng)物管理的各個(gè)方面，以及可能影響菌群變化的操作(例如飲食和用藥)。然而，必須對畜群中出現的任何感染性疾病進(jìn)行徹底調查，包括進(jìn)行實(shí)驗室檢測。必須排除損害動(dòng)物健康、影響實(shí)驗研究以及人畜共患的病原體。

應與時(shí)俱進(jìn)，選擇合適的篩查方法和實(shí)驗室診斷方法。根據病原體的特點(diǎn)和篩查目的，制定合適的篩查周期和采樣數量。在某些情況下，可能需要對一整群動(dòng)物進(jìn)行單獨和重復采樣，例如向一個(gè)已經(jīng)建立并明確病原體狀況的種群中，引入新批次動(dòng)物。在其他情況下，可提前制定采樣頻率，針對特定的動(dòng)物和數量進(jìn)行定期采樣，例如一個(gè)封閉穩定的種群中，沒(méi)有出現可疑癥狀或污染，定期進(jìn)行的病原體篩查。

并僅限于具有代表性的樣本，例如在不懷疑感染或污染的情況下，在穩定的封閉種群中進(jìn)行例行/定期健康檢查。在制定動(dòng)物健康管理方案時(shí)進(jìn)行風(fēng)險評估是非常重要的。

必須制定書(shū)面的動(dòng)物健康管理方案，包括方案細節描述，列出需要篩查的病原體清單，需要檢測的動(dòng)物數量以及陽(yáng)性結果，在過(guò)去18個(gè)月中的歷史檢測結果以及針對陽(yáng)性病原體采取的措施，病原體檢測的方法，病原體檢測的實(shí)驗室名稱(chēng)等。

（c）：妊娠狀態(tài)檢查

對于使用懷孕動(dòng)物的研究，應提供有關(guān)動(dòng)物來(lái)源的適當細節（來(lái)源于外部繁殖動(dòng)物或內部配種）。

此外，在妊娠的最后三分之一期間暴露于實(shí)驗產(chǎn)生的不良反應意味著(zhù)胎兒也受到操作的影響，因此在Directive 2010/63/EU（歐盟保護實(shí)驗動(dòng)物新指令）第1條第3段(a)(ii)中有明確說(shuō)明。在歐盟，禁止在臨近動(dòng)物預產(chǎn)期時(shí)進(jìn)行運輸操作。在實(shí)驗使用前運輸時(shí)，需要提供動(dòng)物繁殖條件和胎齡，以及關(guān)于產(chǎn)仔數的詳細信息，這是很重要的。

雖然沒(méi)有明確禁止，但應該避免運送懷孕非常早期的雌性動(dòng)物。應保障胚胎安全著(zhù)床，以避免妊娠早期有價(jià)值胎兒被再吸收。繁育對實(shí)驗結果有很大影響，特別是對依賴(lài)于內分泌因素的生理狀態(tài)研究以及人道終點(diǎn)的判定。供應商和用戶(hù)之間的良好溝通是必不可少的。妊娠/不育狀態(tài)可根據胎齡使用各種方法進(jìn)行診斷，包括血液檢測孕酮（母豬）和妊娠相關(guān)糖蛋白（反芻動(dòng)物），直腸觸診（母豬和奶牛）和超聲檢查（母豬和反芻動(dòng)物）。

建立從供應商到用戶(hù)的運輸

豬和反芻動(dòng)物的運輸應符合相關(guān)法律，并考慮到動(dòng)物福利、人身安全和生物安全等因素。如果衛生和健康狀況相同，最好選擇盡可能靠近動(dòng)物使用者的供應商，以減少運輸導致的應激。如果涉及進(jìn)口動(dòng)物采購，必須遵守出口國、過(guò)境國和進(jìn)口國的現行法規。應考慮所有這些國家的公共假日，以避免運輸過(guò)程不可預見(jiàn)的中斷或延誤。

動(dòng)物使用機構

適用于供應商的運行狀況管理策略也適用于動(dòng)物使用機構。當動(dòng)物到達使用設施時(shí)，應采取措施維持或提高標準，以保障動(dòng)物福利和實(shí)驗進(jìn)展。

在實(shí)驗設施中飼養農場(chǎng)動(dòng)物是一項巨大的挑戰，因為必須考慮以下方面：

將來(lái)自不同產(chǎn)地的農場(chǎng)的動(dòng)物分開(kāi)，并確保采取適當的檢疫程序；

區分不同種類(lèi)、性別及年齡；

符合飼養反芻動(dòng)物和豬的法律要求。

當將農業(yè)動(dòng)物用于研究目的時(shí)，適用的法規和標準是Directive 2010/63/EU和ETS 123，即使動(dòng)物來(lái)自農業(yè)環(huán)境，在農場(chǎng)時(shí)是適用農場(chǎng)動(dòng)物的相關(guān)法規。如果可以證明研究的目的需要在農業(yè)條件下進(jìn)行，出于科學(xué)原因，可以適用農業(yè)標準。最后，除了這些適用于農場(chǎng)動(dòng)物福利的歐洲法規和標準外，FASS《研究和教學(xué)中農業(yè)動(dòng)物的護理和使用指南》提供了有趣的建議。

農場(chǎng)動(dòng)物的住所應該允許它們的“自然行為，特別是需要放牧或覓食、鍛煉和社交”。相容動(dòng)物的群養非常重要，因為它們是群居動(dòng)物，有與同種動(dòng)物互動(dòng)的強烈動(dòng)機。

足部護理管理、寄生蟲(chóng)控制措施（考慮抗寄生蟲(chóng)治療的潛在耐藥性）、定期審查生產(chǎn)指標和BCS評分非常必要。所有操作和發(fā)現都應記錄在案，并應創(chuàng )建一個(gè)設施數據庫并持續更新，以供進(jìn)一步參考或評估。

實(shí)驗飼養家豬和反芻動(dòng)物作為人類(lèi)疾病模型，必須為每一項研究制定一個(gè)基本的標準監測方案和防護要求。根據具體的研究領(lǐng)域和研究環(huán)境，建立更加個(gè)性化的健康和福利評估和管理方法尤為重要。應考慮采取適當措施確保動(dòng)物的福利（良好的身心健康）（環(huán)境豐富，其中與其他動(dòng)物和工作人員的積極互動(dòng)非常重要）。

必須在交叉感染風(fēng)險評估的基礎上制定防護要求，范圍可以從僅更換衣服、戴口罩和/或穿鞋套或特殊空氣過(guò)濾器系統（如高效過(guò)濾器），并根據需要結合氣壓差。根據德國、瑞士和奧地利的數據，在大多數研究機構中，防護要求只包括更換衣服和佩戴口罩和鞋套。

衛生和飼養操作應基于風(fēng)險評估，并應與所進(jìn)行的實(shí)驗類(lèi)型及其生物安全水平成比例。所有表面應能夠合理去除污染，同時(shí)對動(dòng)物和設施人員是安全的。此外，應避免廢物處理造成的交叉污染。

適應和隔離檢疫：

1）適應期

運輸過(guò)程給動(dòng)物帶來(lái)了應激，擾亂了它們的正常環(huán)境。適應期的目的是讓動(dòng)物從運輸的應激中恢復過(guò)來(lái)，并適應新的環(huán)境（飼養室和籠具、群養同伴、飲水系統和食物、工作人員等）。在此期間，應盡一切努力盡量減少新環(huán)境的影響，最初應保留相同的群養同伴、墊料或食物，并逐步更換墊料。適應期的長(cháng)短（從動(dòng)物到達機構直到被使用）取決于各種因素，如動(dòng)物的年齡、運輸的類(lèi)型和持續時(shí)間、地理因素（如氣候、海拔）、研究的類(lèi)型（急性或慢性項目）以及研究所需的動(dòng)物年齡（如斷奶后的仔豬）。另一個(gè)決定適應期的重要因素是動(dòng)物必須與飼養管理人員建立信任和信心的關(guān)系。動(dòng)物的適應過(guò)程應在實(shí)驗使用前完成。

2）檢疫

檢疫要求隔離等待健康評估結果的動(dòng)物群體，主要是為了保護已經(jīng)在設施中的動(dòng)物的健康。如果一個(gè)設施一次只接收一批動(dòng)物(來(lái)自同一供應商的年齡相近的動(dòng)物)，并采取全進(jìn)/全出的措施，那么這些動(dòng)物可以在同一個(gè)飼養室進(jìn)行檢疫和實(shí)驗操作。同樣，如果有多個(gè)可以適當隔離的飼養室，則可以使用飼養室進(jìn)行檢疫以及實(shí)驗操作，避免再次轉移動(dòng)物對動(dòng)物造成應激。可以通過(guò)各種體檢和操作進(jìn)行檢疫，達到檢疫效果。檢疫應能夠確保動(dòng)物在到達使用者設施后，能夠暴露出亞臨床疾病，以避免動(dòng)物質(zhì)量影響研究有效性。

在檢疫期間，通過(guò)臨床檢查（個(gè)體臨床評分記錄表）以及實(shí)驗室檢測（診斷測試），監控動(dòng)物健康，以評估是否可以進(jìn)入實(shí)驗使用階段。檢疫期長(cháng)短取決于對動(dòng)物進(jìn)行監測和篩選的病原體的潛伏期。潛伏期的長(cháng)短可能構成重大挑戰。因此，在供應商農場(chǎng)實(shí)施強有力的健康監測方案，是非常重要的。在檢疫期結束時(shí)，使用設施根據排除清單上的疾病病原體，剔除檢測呈陽(yáng)性的動(dòng)物（可以考慮治療的某些特定情況除外，例如某些類(lèi)型的寄生蟲(chóng)感染）。在決定將陽(yáng)性動(dòng)物安樂(lè )死之前，應盡量嘗試將動(dòng)物送回供應商，或安排其他合理處置措施。處置動(dòng)物尸體的方式應避免傳播病原體，并符合國家法律法規。經(jīng)過(guò)判斷（視疾病潛伏期而定），可以適當延長(cháng)檢疫期。如果動(dòng)物意外死亡，診斷性尸檢非常重要，并能夠提供大量信息。

人員：

一個(gè)經(jīng)驗豐富且能力強的主獸醫，對于設施管理是非常重要的。所有設施內工作人員，都應該對設施管理以及涉及的物種有足夠的知識背景以及認識程度，應能夠識別疾病的臨床癥狀、痛苦和疼痛、評估緊急情況。主獸醫應積極主導設施內工作人員的培訓，并定期復訓。與動(dòng)物健康相關(guān)的問(wèn)題，人員應立即報告給主治獸醫以便及時(shí)診治。主治獸醫和動(dòng)物設施管理員都有責任及時(shí)解決所報告的問(wèn)題。研究人員、動(dòng)物設施人員和主治獸醫之間定期、頻繁的互動(dòng)和良好、清晰的溝通對于設施的良好運作非常重要。所有人員都應了解并遵守設施防護操作的必要性，能夠正確使用適當的PPEs。

健康監控體系：

健康監控體系在很大程度上取決于所進(jìn)行研究的類(lèi)型及其持續時(shí)間(急性或慢性研究)，在制定時(shí)，應綜合考慮供應商設施的健康監控體系。

1）風(fēng)險評估

評估通過(guò)無(wú)生命媒介（材料）或活媒介（害蟲(chóng)、其他動(dòng)物、人類(lèi)）引入病原體的風(fēng)險非常重要，并為這些風(fēng)險制定控制措施。例如：

與風(fēng)險相對應的，適當的設施工程控制措施（氣壓等級、空氣過(guò)濾、清潔和消毒設施和設備、進(jìn)出設施的操作、人員PPEs的要求等）。

任何時(shí)候都應備有人員PPEs。

家中有同種類(lèi)動(dòng)物的員工應采取特別的預防措施（衛生-淋浴，指定工作服等）。

應制定明確的外來(lái)人員參觀(guān)政策。衛生和檢疫規則應事先溝通，并應保留書(shū)面記錄(所有訪(fǎng)客已理解并遵守設施規則的簽名文件、訪(fǎng)客簿或類(lèi)似文件等)。對進(jìn)出設施的人員和車(chē)輛進(jìn)行登記。

2）對動(dòng)物的監控

應定期對動(dòng)物進(jìn)行臨床健康檢查（使用個(gè)體臨床記分表）。

應進(jìn)行定期篩查，以確保納入研究的動(dòng)物不受有害病原體的影響（仍符合納入和排除標準）。對患病動(dòng)物或意外死亡動(dòng)物的診斷也能夠為健康監控體系提供信息。

如果研究結束時(shí)要將動(dòng)物安樂(lè )死，則應安排尸檢。并記錄相關(guān)的大體病變和出具組織病理學(xué)結果報告。診斷操作可能需要額外的檢測。

3）應急計劃

應制定預案，以備可能出現的非預期的病原體陽(yáng)性檢測結果。具體取決于病原體陽(yáng)性結果對人和動(dòng)物的影響（人畜共患病）、對研究的影響、對設施(應報告疾病爆發(fā))的影響。

應制定災難應對計劃，如果設施發(fā)生物理?yè)p壞，需要將動(dòng)物轉移到其他場(chǎng)所。

參考文獻：

Federation of European Laboratory Animal Science Associations recommendations of best practices for the health management of ruminants and pigs used for scientific and educational purposes Laboratory Animals 2021, Vol. 55(2) 117–128 ! The Author(s) 2020