血生化檢測

我們在前文《嚙齒動(dòng)物血生化項目分析（上）》中介紹了嚙齒動(dòng)物的蛋白質(zhì)與肝膽功能指標以及腎臟功能指標的檢測意義。本文我們將繼續對嚙齒動(dòng)物的脂質(zhì)代謝、胰腺功能、糖代謝等相關(guān)常見(jiàn)血生化指標進(jìn)行介紹。

脂代謝檢測

脂質(zhì)的運輸對機體內細胞功能、代謝等起著(zhù)至關(guān)重要的作用，此外它還對組織起著(zhù)保護作用，也作為生物體最重要的能量來(lái)源之一。由于脂質(zhì)具有很廣泛的作用，因此其穩態(tài)也會(huì )隨著(zhù)機體疾病等發(fā)生變化。

1.總膽固醇（Total cholesterol, TC）

血清總膽固醇指血液中各脂蛋白所含膽固醇總和。嚙齒類(lèi)動(dòng)物的脂代謝指標與人類(lèi)相比差異明顯。大小鼠體內的大部分膽固醇都以高密度脂蛋白形式存在，且缺乏膽固醇酯轉運蛋白（CETP）。膽固醇濃度的增加多見(jiàn)于動(dòng)物內分泌、肝臟或腎臟疾病；降低則常見(jiàn)于動(dòng)物營(yíng)養不良等。

2.甘油三酯（Triglyceride, TG）

甘油三酯構成脂肪組織，參與TC合成以及血栓形成。需要注意的是，小鼠的血脂比較穩定，對抗高血脂的能力很強，甘油三酯不容易升高，尤其C57BL小鼠一般不適合單純用于高甘油三酯血癥的造模。TG升高多見(jiàn)于動(dòng)物過(guò)度肥胖、糖尿病等，而營(yíng)養不良則是導致其降低的主要因素。

3.高密度脂蛋白（High-density lipoprotein, HDL）

高密度脂蛋白主要由肝臟和小腸合成，含有膽固醇、蛋白質(zhì)和磷脂，但甘油三酯很少。 與人類(lèi)和非人靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物不同的是，大鼠體內的HDL濃度高于LDL（低密度脂蛋白膽固醇），這可能是由于大鼠體內缺乏膽固醇酯轉運蛋白（CETP）所致。

高密度脂蛋白可以清除體內膽固醇，當HDL升高時(shí)，并非病理表現，無(wú)需關(guān)注；當動(dòng)物出現動(dòng)脈硬化、糖尿病、慢性腎衰時(shí)，HDL表現為降低，且老年動(dòng)物更易出現降低情況。

4.低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein, LDL）

低密度脂蛋白由極低密度脂蛋白轉化而來(lái)，含有豐富的蛋白質(zhì)、少量的膽固醇和甘油三酯。因此，LDL出現降低的情況，提示動(dòng)物機體血脂不高，可不予關(guān)注；但當LDL出現升高時(shí)，應該考慮甲狀腺功能低下、慢性腎衰等，尤其需要關(guān)注動(dòng)脈粥樣硬化，LDL是發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的重要危險指標之一。

5.脂蛋白（Lipoprotein, Lip）

嚙齒類(lèi)動(dòng)物會(huì )在肝臟和小腸中合成載脂蛋白（apoB-100和apoB-48），它們是血漿中運輸脂類(lèi)的重要成分。血漿中載脂蛋白水平上升，與糖尿病腎病、尿毒癥等相關(guān)；肝臟疾病可使載脂蛋白水平下降。

6.游離脂肪酸（Nonestesterified Fatty Acid, NEFA）

游離脂肪酸在肝臟、脂肪和乳腺組織中合成。當動(dòng)物長(cháng)期使用高脂肪/低碳水化合物的飼料時(shí)，會(huì )導致NEFA合成減少；當動(dòng)物患有伴有脂肪酶活性增高的高血脂癥時(shí)，會(huì )導致血漿中NEFA增加。

胰腺功能檢測

胰腺分為兩部分功能，一部分具有外分泌功能，這部分又稱(chēng)為胰腺腺泡，是胰腺最大的組成部分，用來(lái)評估胰腺胰泡功能的檢測包括淀粉酶和脂肪酶。另一部分具有內分泌功能，許多檢測都可用來(lái)評估胰腺的內分泌功能，如傳統的血糖監測，以及果糖胺和糖化血紅蛋白等。

1.淀粉酶（Amylase）

淀粉酶分子量較小，可被腎小球濾過(guò)，是尿液中唯一可見(jiàn)的血清酶。淀粉酶雖主要來(lái)源于胰腺，但唾液腺和小腸也可以產(chǎn)生。淀粉酶在大鼠和小鼠的唾液腺中的濃度高于其他實(shí)驗動(dòng)物，因此大小鼠淀粉酶的增高也可以考慮涎腺疾病。

通常，血淀粉酶濃度升高最常見(jiàn)于急性胰腺炎，此外，慢性胰腺炎的復發(fā)期和胰管阻塞也可致淀粉酶升高。但是淀粉酶升高的水平與胰腺炎的嚴重程度沒(méi)有直接的比例關(guān)系。由于淀粉酶可以經(jīng)腎臟排泄，因此任何原因導致腎小球濾過(guò)率降低時(shí)，都可引起血清淀粉酶升高。

2.脂肪酶（Lipase）

脂肪酶是一組催化長(cháng)鏈脂肪酸甘油酯水解的酶。大多數血清脂肪酶來(lái)源于胰腺，少量來(lái)源于胃腸道黏膜。過(guò)量的脂肪酶經(jīng)腎臟濾過(guò)，因此在胰腺疾病早期，脂肪酶仍處于正常水平，當病情逐漸加重時(shí)，脂肪酶水平才出現升高趨勢。

在慢性進(jìn)行性胰腺疾病中，受損的胰腺細胞會(huì )被結締組織取代，導致不能產(chǎn)生相應的酶，因此淀粉酶和脂肪酶會(huì )呈現漸進(jìn)性降低。脂肪酶活性升高多見(jiàn)于腎臟和肝臟功能異常。此外，服用類(lèi)固醇藥物可引起脂肪酶升高，但對淀粉酶無(wú)影響。

糖代謝檢測

1.葡萄糖（Glucose, Glu）

血糖的水平可以用來(lái)評估胰腺功能，其調節機制比較復雜，除了胰島素分泌缺乏外，胰高血糖素、甲狀腺素、腎上腺素和糖皮質(zhì)激素都可以使血糖升高；葡萄糖降低多見(jiàn)于營(yíng)養不良、慢性貧血等。由于成熟紅細胞會(huì )利用葡萄糖提供能量，因此在使用血漿或者血清樣本時(shí)，應立即將血清或血漿與紅細胞分離，否則在室溫條件下，紅細胞會(huì )使樣本中血糖含量每小時(shí)下降10%。在檢測葡萄糖前，應對動(dòng)物進(jìn)行禁食，但對于嚙齒動(dòng)物（尤其小鼠）來(lái)說(shuō)，由于它們屬于夜間進(jìn)食動(dòng)物，如果進(jìn)行夜間禁食，其代謝消耗相當于靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物禁食24-48小時(shí)（肝臟糖原基本耗盡），因此5-6小時(shí)禁食更適合小鼠。

2.糖化血紅蛋白（Glycated hemoglobin, GHb）

糖化血紅蛋白也稱(chēng)為血紅蛋白A1C（HbA1c），是血紅蛋白與葡萄糖發(fā)生不可逆結合反應的產(chǎn)物。當機體發(fā)生高血糖時(shí)，血紅蛋白與葡萄糖結合增加，從而使糖化血紅蛋白升高，因此糖化血紅蛋白可以直接反映機體血糖水平。糖化血紅蛋白反映的是紅細胞壽命期間的平均血糖濃度，大鼠紅細胞壽命約60天，小鼠紅細胞壽命約為35-50天。因此和果糖胺相比，糖化血紅蛋白反映了更長(cháng)時(shí)間內的血糖水平。但需要注意的是如果檢測是基于高效液相層析法原理，由于溶血性貧血動(dòng)物的紅細胞壽命短，因此會(huì )導致糖化血紅蛋白結果出現假性降低。

3.果糖胺（Fructosamine）

果糖胺是葡萄糖與蛋白質(zhì)（尤其白蛋白）發(fā)生不可逆結合的產(chǎn)物。果糖胺升高表示動(dòng)物持續存在高血糖；但動(dòng)物發(fā)生低蛋白血癥，其血清果糖胺水平會(huì )假性降低。

有研究表明，果糖胺可在臨床研究中，可作為糖尿病動(dòng)物的血糖監測的有效指標。

其他

在臨床檢測中，還有一些生化項不針對任何器官或系統，但可以輔助提供一些診斷信息，如乳酸脫氫酶、肌酸激酶等。

1.肌酸激酶（creatine kinase, CK）

許多組織中都含有肌酸激酶，胃腸道、腎臟、脾臟和胰腺中含有少量CK，而骨骼肌、心肌和大腦中含有大量CK。因此當骨骼肌、心肌受損時(shí)，CK會(huì )從細胞中滲出，導致血液中CK含量增加。

由于任何損傷肌細胞膜的物質(zhì)都可以導致血液中CK升高，在實(shí)際檢測時(shí)，可對CK同工酶檢測來(lái)進(jìn)行區分損傷來(lái)源。CK有3中主要同工酶：CK-MB（心臟型）、CK-BB（腦型）、CK-MM（骨骼型）。比較特殊的是，在大鼠血小板中，CK含量是紅細胞的30倍，且目前僅發(fā)現存在CK-BB。

另外，肌內注射、手術(shù)等導致肌肉損傷可引起CK升高；   EDTA、陽(yáng)光直射或測定不及時(shí)可引起樣本中CK假性升高。

2.乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH）

乳酸脫氫酶是一種催化乳酸轉化為丙酮酸的血清酶。LDH一般不具有器官特異性，它來(lái)源廣泛，幾乎所有的組織中都含有LDH，但是物種間分布具有差異。如大鼠骨骼肌中分布最多，其次是心肌（77%）和肝臟（41%）。

LDH的升高雖然多見(jiàn)于肝臟受損和肌肉損傷，但是它缺乏評價(jià)肝損傷的特異性和敏感性。因此在嚙齒動(dòng)物中，LDH一般多用于檢測實(shí)驗性誘導心肌損傷。為了提高LDH測定心肌損傷的特異性，也可以測定其同工酶，即LDH1和LDH2。

需要注意的是，在常用的實(shí)驗動(dòng)物中，血小板、紅細胞、白細胞、肝臟中都可能會(huì )表達LDH同工酶，因此肝損傷、溶血和凝血均會(huì )混淆心臟損傷的診斷。另外，感染乳酸脫氫酶增高病毒（LDEV）的小鼠，血清中LDH含量可增高3-5倍。

3.C-反應蛋白（C-reactive protein, CRP）

CRP是第一個(gè)在人類(lèi)身上發(fā)現的急性期反應蛋白（Acute Phase Reaction Proteins，APR），目前CRP也被認為是嚙齒動(dòng)物的APR蛋白，肝細胞是合成CRP的主要部位。CRP的主要生物學(xué)功能是通過(guò)于配體（凋亡或壞死的細胞，或入侵的細菌、真菌、寄生蟲(chóng)等的磷酰膽堿）結合，激活補體和單核吞噬細胞系統，將帶有配體的病原體或病理性細胞清除。在嚙齒動(dòng)物體內，當炎癥或創(chuàng )傷發(fā)生后6h內，CRP可迅速升高至上千倍，在疾病治愈后，其含量急速下降。發(fā)生心臟病、敗血癥和腫瘤等多種疾病，CRP都會(huì )急劇上升。

比較特殊的是，健康大鼠體內CRP值較高，且CRP的水平與年齡相關(guān)并呈正比。在健康小鼠和豚鼠血清中，幾乎無(wú)法檢出CRP。在這兩種動(dòng)物體內，CRP不作為急性期蛋白而發(fā)揮作用。特別是豚鼠，在正常狀態(tài)和急性期豚鼠血清中，都無(wú)法檢出CRP，這主要是因為豚鼠CRP基因中缺乏適當的啟動(dòng)子區域。