血生化檢測

血生化檢測是對實(shí)驗動(dòng)物血液內離子、脂類(lèi)、蛋白質(zhì)和各種酶等物質(zhì)濃度的檢測。這些檢測項目的變化一般都與特定器官的功能有關(guān)，對評估實(shí)驗動(dòng)物健康狀態(tài)以及驗證實(shí)驗動(dòng)物造模是否成功等，都具有重要指導意義。由于血生化涉及項目較多，本號將分兩篇對其進(jìn)行介紹。

絕大多數血生化檢測都可以用血清或肝素血漿樣本檢測，兩者的檢測結果會(huì )有差異，但這種差異并無(wú)臨床意義。然而，對于需要長(cháng)期監測動(dòng)物，相同指標應在監測周期內選擇相同樣本進(jìn)行檢測。樣本的保存和抗凝劑的使用均應根據不同的檢測項目進(jìn)行選擇。此外，樣本采集的質(zhì)量可直接影響檢測結果。

對于大多數血生化項目，樣本應在采集后及時(shí)檢測，如不能及時(shí)檢測，3天內可4℃或冷凍（-20℃或更低溫度）保存；若保存時(shí)長(cháng)超出3天，需冷凍（-20℃或更低溫度）保存，切忌將樣本反復凍融后進(jìn)行檢測。但一些生化項目低溫保存也會(huì )影響其活性，如乳酸脫氫酶和谷草轉氨酶。

尿素、鉀、鈉離子避免使用含銨鹽類(lèi)抗凝劑進(jìn)行檢測；谷丙轉氨酶、肌酸激酶和總蛋白避免使用枸櫞酸鈉抗凝劑進(jìn)行檢測。本文僅列出部分生化項的抗凝劑選擇，更多信息可參考WHO 2002年發(fā)布的《實(shí)驗室檢查中抗凝劑的使用》。

嚙齒動(dòng)物尤其實(shí)驗大小鼠的血生化參考范圍，目前仍沒(méi)有建立標準參考。這與實(shí)驗大小鼠的品系眾多有關(guān)。已有文獻證明，不同品系的小鼠血生化會(huì )有差異。并且血生化的結果與動(dòng)物的年齡和性別等因素相關(guān)。另外，由于不同機構使用的檢測方法不同，如干式生化分析儀和濕式生化分析儀，且使用試劑盒品牌不同、試劑盒檢測原理不同等，均會(huì )導致結果不同。這些因素都導致了實(shí)驗大小鼠的血生化標準參考范圍無(wú)法建立，目前可查到的參考范圍，均應根據內部情況進(jìn)行參考。

蛋白質(zhì)與肝膽功能檢測

1.   總蛋白（Total protein, TP）

血液等體液中的蛋白質(zhì)種類(lèi)眾多，但目前尚無(wú)一種常規檢測技術(shù)可以對體液中各種類(lèi)型蛋白質(zhì)總量進(jìn)行準確測定。因此，臨床對體液中總蛋白質(zhì)測定通常是假設所有的體液蛋白質(zhì)均是單純蛋白質(zhì)，且各種體液蛋白與化學(xué)試劑的反應性均一致。基于以上兩個(gè)假設，目前測定總蛋白最常用的方法有雙縮脲法和紫外分光光度法。血清中的總蛋白實(shí)際檢測的是除纖維蛋白原以外的成分，因此用血漿測定總蛋白較血清測定值偏高。

總蛋白的濃度主要反應肝臟合成功能和腎臟病變造成蛋白質(zhì)丟失情況，可以用來(lái)判斷機體的水合狀態(tài)，脫水的動(dòng)物總蛋白濃度會(huì )相對升高，即高蛋白血癥。當動(dòng)物出現慢性肝臟疾病、骨髓瘤、自身免疫性疾病、慢性炎癥和感染等，會(huì )導致TP和球蛋白同時(shí)升高。

過(guò)度水合動(dòng)物總蛋白濃度會(huì )相對降低，即低蛋白血癥，此時(shí)動(dòng)物可能會(huì )出現浮腫、胸腔或腹腔積液。TP和白蛋白同時(shí)降低常見(jiàn)于肝功能受損導致蛋白質(zhì)合成減少、營(yíng)養不良、蛋白丟失過(guò)多、消耗增加等病理性因素。

2.   白蛋白（Albumin, ALB）

ALB由肝實(shí)質(zhì)   細胞合成分泌，是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，大部分動(dòng)物的白蛋白占血漿蛋白的35%~50%。ALB是動(dòng)物機體內重要的營(yíng)養蛋白，參與維持內環(huán)境穩定，也是血漿中多種物質(zhì)的主要轉運蛋白。當出現炎性疾病、漿細胞瘤、淋巴瘤、腎小球腎炎、營(yíng)養不良、過(guò)度水合等，均會(huì )導致嚙齒動(dòng)物出現血清白蛋白的降低；ALB升高則多見(jiàn)于脫水動(dòng)物。

3.   球蛋白（Globulin，GLB）

球蛋白可以分為α球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白，大多數α球蛋白和β球蛋白由肝臟合成，γ球蛋白由漿細胞合成。α球蛋白中比較重要的兩種蛋白質(zhì)分別是高密度脂蛋白和極低密度脂蛋白；β球蛋白包括補體（C3、C4）、轉鐵蛋白和鐵蛋白；γ球蛋白（即免疫球蛋白）包括IgG、IgD、IgE、IgA和IgM。

球蛋白的濃度一般通過(guò)總蛋白與白蛋白的差值來(lái)進(jìn)行計算。球蛋白減少主要由于合成減少，如使用免疫抑制劑；球蛋白的增加多見(jiàn)于γ球蛋白，常見(jiàn)原因有慢性肝臟疾病、免疫性疾病、骨髓瘤等。

4.   白蛋白/球蛋白（A/G）

白球比應結合蛋白質(zhì)指標進(jìn)行分析，不同種類(lèi)、品系、年齡、性別動(dòng)物的白球比都有差異，很多病理狀態(tài)會(huì )改變白球比。當白蛋白和球蛋白均變化時(shí)，如出血導致白蛋白和球蛋白丟失、脫水導致球蛋白和白蛋白增加時(shí)，A/G比值將變化不大或保持在正常范圍內；當其中一個(gè)數值發(fā)生變化且占主導時(shí)，那么A/G比值將發(fā)生異常，如免疫球蛋白的產(chǎn)生導致A/G比值降低、免疫球蛋白缺乏導致A/G比值增高。在臨床上，ALB、TP、GLB和A/G比值應結合一起進(jìn)行分析。

5.   谷丙轉氨酶（Alanine aminotransferase, ALT）

臨床上廣泛用來(lái)作為肝細胞損傷指標，也是中間代謝的關(guān)鍵酶。ALT主要存在于肝臟，但也廣泛存在于腎臟、心肌、骨骼肌、胰腺等組織中，這些組織出現損傷或壞死，也會(huì )導致血清ALT水平升高。由于A(yíng)LT主要存在于細胞質(zhì)，釋放比較容易，因此ALT升高可出現在組織損傷早期。血液中ALT的水平與肝損傷的嚴重程度不呈現相關(guān)性，ALT通常會(huì )在肝損傷12h內升高，并在24~48h內達到峰值，除非存在慢性肝損傷，一般情況下血清ALT水平會(huì )在幾周內恢復正常。比較特殊的是，豚鼠中ALT活性較低，因此ALT不適合用來(lái)作為判斷其肝損傷的標志物。

目前已發(fā)現在人類(lèi)、大小鼠和狗中，ALT具有兩種亞型，分別為ALT1和ALT2，其中ALT1主要在腎臟、肝臟、脂肪和心組織中表達；而ALT2主要在肌肉和脂肪中表達。在小鼠中，ALT2被認為是脂肪變性的標志物。ALT亞型的區分可以更精準反應器官損傷情況，但目前ALT分型的檢測尚未廣泛應用在實(shí)驗動(dòng)物檢測中。

6.   谷草轉氨酶（Aspartate aminotransferase, AST）

AST主要存在于肝細胞內，在正常大鼠血清中，細胞質(zhì)中的AST約占總AST活性82%，線(xiàn)粒體膜上的AST約占總AST活性18%。此外，AST也存在于其他組織中，如心臟、骨骼肌、腎臟、胰腺等，這些組織損傷或壞死時(shí)，血清中AST也會(huì )升高。AST水平升高表示非特異性肝臟損傷，嚙齒動(dòng)物在應激狀態(tài)或肌內注射也可能導致AST升高，AST升高應先檢查血清或血漿樣本是否溶血，結合肌酸激酶水平，排除是否為肌肉損傷導致AST升高，上述原因排除后，方可考慮為肝損傷導致AST升高。

7.   堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase, ALP）

ALP是一組在酸性條件下水解磷酸單酯類(lèi)化合物的酶，在許多組織中存在其同工酶，尤其是肝膽系統、骨骼內的成骨細胞、軟骨內的成軟骨細胞、腸道細胞。ALP水平與嚙齒類(lèi)動(dòng)物的年齡及性別具有相關(guān)性，處于生長(cháng)期的未成年動(dòng)物ALP水平較高，隨著(zhù)動(dòng)物年齡的增長(cháng)，ALP水平明顯降低；且大多數雌性動(dòng)物ALP水平低于雄性動(dòng)物。而ALP的病理性升高則常見(jiàn)于發(fā)生肝膽疾病、骨骼疾病、惡性腫瘤時(shí)的動(dòng)物。

8.   γ-谷氨酰轉移酶（Gamma-glutamyltransferase, GGT）

GGT存在于許多組織中，包括腎臟、胰腺、腸道和肌細胞。GGT升高多見(jiàn)于動(dòng)物發(fā)生肝臟疾病、膽管阻塞以及急性胰腺炎等。需要注意的是，GGT在腎臟中濃度最高，但發(fā)生腎臟疾病時(shí)，GGT的增加并不明顯，這是因為GGT會(huì )從受損的管狀上皮細胞中釋放到尿液中，而不是血液中。

9.   膽紅素（Bilirubin, Bil）

膽紅素是一種不可溶性分子，由脾臟內巨噬細胞降解血紅蛋白產(chǎn)生，是各種含血紅素蛋白中的血色素在一些系列酶作用下的降解產(chǎn)物，與脂類(lèi)的消化吸收及黃疸形成具有重要關(guān)系。膽紅素在光照下分解，因此，樣本應避光保存以保證結果準確性。當動(dòng)物出現膽汁運輸障礙或腸道吸收不良時(shí)，會(huì )導致膽紅素降低；當動(dòng)物出現溶血性疾病導致紅細胞破壞或內出血時(shí)，可使膽紅素含量增高。

10.  膽汁酸（Bile acids, TBA）

嚙齒動(dòng)物的膽汁酸代謝與人類(lèi)有所不同，大小鼠的膽汁酸以膽固醇為原料在肝細胞中合成，由肝源性分子組成，并主要與牛磺酸結合。膽汁酸可以促進(jìn)脂類(lèi)的消化吸收、調節膽固醇的代謝以及促進(jìn)膽汁分泌。當動(dòng)物出現肝功能受損、膽道阻塞等疾病時(shí)，均會(huì )導致膽汁酸水平增加。

腎臟功能檢測

1. 尿素（Urea）

尿素是哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物，可自由濾過(guò)腎小球，當腎實(shí)質(zhì)受損時(shí)，腎小球濾過(guò)率下降，血尿素濃度會(huì )升高，因此可以通過(guò)測定尿素水平來(lái)評估腎功能。需要注意的是，產(chǎn)尿酶菌（如金黃色葡萄球菌/變形桿菌屬/克雷伯菌屬）污染的血液樣本可導致尿素分解，導致尿素水平下降，為避免這種情況，樣本采集后應及時(shí)進(jìn)行檢測，如不能及時(shí)檢測，應將樣本放置在冰箱冷藏中保存。另外不同性別及年齡差異，也會(huì )影響尿素水平，隨著(zhù)動(dòng)物年齡增長(cháng)，尿素水平會(huì )呈現下降趨勢。尿素的增加多見(jiàn)于高蛋白飲食、脫水以及腎功能衰竭等。

2. 肌酐（Ceatinine, Crea）

血肌酐經(jīng)腎小球濾過(guò)進(jìn)入原尿，并且不被腎小管重新吸收，機體內肌酐應保持恒定，因此測定血肌酐水平可以用來(lái)評估腎功能。但是和尿素一樣，肌酐不是腎功能的準確指標，當腎功能損傷近75%時(shí)，方可引起血肌酐水平升高。肌酐降低則多見(jiàn)于動(dòng)物營(yíng)養不良、貧血等。

3. 尿酸（Uric acid, UA）

尿酸是嘌呤堿基代謝產(chǎn)物，主要存在于肝臟中，小部分可經(jīng)肝臟隨膽汁排泄。尿酸可自由濾過(guò)腎小球，也可腎小管排泄。因此，排除外源性尿酸干擾，血尿酸可反映腎小球濾過(guò)功能和腎小管重吸收功能。當機體出現急性或慢性腎炎、多發(fā)性骨髓瘤等均會(huì )導致UA升高；肝臟壞死、肝功能衰竭等病理原因則會(huì )導致UA降低。