目 的

靈長(cháng)類(lèi)獸醫協(xié)會(huì )（APV，Association of Primate Veterinarians）意識到在非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物（NHP，Non-human primate）中，腦脊液（CSF，Cerebro-Spinal Fluid）的采集可能對于臨床和生物醫學(xué)研究都是必需的。由于這項技術(shù)存在固有風(fēng)險，實(shí)驗動(dòng)物獸醫應確定腦脊液采集對臨床評估的必要性和實(shí)用性。為了生物醫學(xué)研究目的而進(jìn)行腦脊液采集須在動(dòng)物護理和使用委員會(huì )（IACUC，Institutional Animal Care and Use Committee）或等同的監管機構批準下進(jìn)行。以下建議為IACUC、使用非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物模型的研究人員以及獸醫人員提供基本信息，以供在制定腦脊液采集相關(guān)的政策和標準操作程序（SOP，Standard Operating Procedure）時(shí)予以考慮。

背 景

腦脊液分析是一種強大的工具，可加強對中樞神經(jīng)系統內發(fā)生的各種過(guò)程的檢測，例如：出血、炎癥、感染、腫瘤和其他臨床情況。此外，對腦脊液中化合物（如激素、藥物、神經(jīng)遞質(zhì)、生物標志物、代謝產(chǎn)物和病毒）進(jìn)行系列評估，在基礎研究和轉化研究中同樣非常重要。中樞神經(jīng)系統中的腦脊液體積可通過(guò)腦脊液的分泌和吸收而維持穩定。

操作注意事項

腦脊液通常通過(guò)腦池或腰椎間隙穿刺采集。其中，通過(guò)腰椎穿刺采集腦脊液的并發(fā)癥風(fēng)險相對較低。因為在大多數非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物中，腰椎穿刺位點(diǎn)遠離脊髓的末端。應適當麻醉動(dòng)物，并使用無(wú)菌技術(shù)進(jìn)行操作，包括剃毛等術(shù)部準備和無(wú)菌材料的使用。至少需使用無(wú)菌手套、注射器和針頭，還可考慮使用無(wú)菌手術(shù)創(chuàng )巾。腦脊液采集通常以側臥位、胸骨臥位或坐位進(jìn)行，分別通過(guò)頸部或脊柱的屈曲來(lái)改善對腦池的進(jìn)入或擴大椎間隙（Gereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。選擇的針頭尺寸和長(cháng)度應適合非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物的種屬和體型（Brady，2000；Cereschlager，1987；Magden，2015；Wolf，2012）。操作時(shí)使用的技術(shù)、設備和耗材，以及圍手術(shù)期的護理因動(dòng)物種屬、研究目的和臨床獸醫的偏好而不同。

有些研究方案可能需隨時(shí)間推移而連續采集腦脊液，或需采集未麻醉的受試對象的腦脊液樣本。對于這些方案，可通過(guò)長(cháng)期植入的腦脊液穿刺導管從清醒狀態(tài)的恒河猴身上連續采集腦脊液，而該導管可連接至皮下的采集接入口（Gilberto，2003；Gilberto，2022；MacAllister， 2016）。

在編寫(xiě)本文件時(shí)，作者盡一切努力尋找總腦脊液體積的數值、硬腦膜穿刺的次數限制或建議、采集頻率、安全的抽取體積以及腦脊液補充速率相關(guān)的最新參考文獻。對于大多數靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物，這方面的文獻很有限。此外，采集方法也各不相同，因為從靈長(cháng)類(lèi)獸醫協(xié)會(huì )成員收集的調查結果表明，各機構均可成功地使用多種不同的方法采集腦脊液。因此，作者根據現有的最佳證據提供了腦脊液采集的考慮因素和建議。

作為參考，先前的研究已確定成年雄性恒河猴（8.0-10.6kg）的表觀(guān)腦脊液體積為10+/-0.06 mL，腦脊液流速為0.018+/-0.003 mL/min（McCully，2020）。恒河猴的腦脊液形成速率范圍為28.6-44.2 μL/min（Curran，1970；Lux，1975；Martins，1977）。在這方面需要對非人靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物進(jìn)行進(jìn)一步的研究，以促進(jìn)更具指導性建議的制定。

潛在不良反應

雖然在非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物中進(jìn)行腦脊液采集時(shí)報道的并發(fā)癥很少，但解剖變異以及不適當或技術(shù)不佳的操作方法可能導致樣本受損或并發(fā)癥，如出血，腦疝，感染，腦干、脊髓或神經(jīng)根損傷以及動(dòng)物的不適。這些并發(fā)癥雖然罕見(jiàn)，但可能會(huì )損害動(dòng)物福利。

由于存在風(fēng)險，應由獸醫或經(jīng)過(guò)培訓的獸醫人員采集腦脊液。對于未成功的腦脊液采集嘗試，實(shí)踐可能有所不同。常見(jiàn)做法是允許一個(gè)人進(jìn)行最多三次未成功的嘗試。在第三次嘗試失敗后，應由另一位合格的人員接替。如果第二個(gè)人在三次嘗試后仍無(wú)法采集到腦脊液，則停止嘗試。同時(shí)動(dòng)物將接受適當的鎮痛治療，并從麻醉中恢復。在嘗試失敗后更換采集部位（例如從腦池到腰椎）通常可成功。如果是未進(jìn)行成像的失敗嘗試，則可使用X線(xiàn)透視輔助穿刺針?lè )胖谩３岣叱晒β释猓跋褚龑н€可降低創(chuàng )傷性穿刺的發(fā)生率。（Eskey，2001）

術(shù)后監測應持續進(jìn)行，直到動(dòng)物返回其籠內，并能在沒(méi)有支撐的情況下保持直立姿勢。對動(dòng)物的監測應該至少持續24小時(shí)或根據IACUC批準的方案進(jìn)行。監測應包括對基本的生理、行為和運動(dòng)參數的評估。尤其應評估動(dòng)物是否出現神經(jīng)功能障礙的跡象，包括但不限于嗜睡、抑郁、昏迷和頭部壓迫感等。在人類(lèi)醫學(xué)中，腦脊液采集后出現的頭痛和由此引起的顱內低壓并不少見(jiàn)。考慮到非人類(lèi)靈長(cháng)類(lèi)動(dòng)物中的這種潛在后遺癥，應在手術(shù)時(shí)給予鎮痛治療，并延長(cháng)2-3天，或根據與頭痛或脊柱疼痛相關(guān)行為的術(shù)后觀(guān)察結果按需提供鎮痛治療。最有效的鎮痛方案可能是術(shù)前即開(kāi)始綜合治療。

IACUC注意事項和記錄保存

IACUC應了解腦脊液采集的相關(guān)工作以及所有可能的并發(fā)癥，并至少每年對其審查。所有相關(guān)信息，如藥物劑量、術(shù)前準備、采集的腦脊液體積、采集頻率以及術(shù)后短期和長(cháng)期恢復情況，均應在IACUC方案中進(jìn)行描述，并在醫療記錄或實(shí)驗室日志中適當地記錄。

腦脊液可能是研究方案中的關(guān)鍵資料，但如果采集技術(shù)不恰當，可能會(huì )對動(dòng)物福利產(chǎn)生影響。遞交方案時(shí)，應提供采集次數和頻率的科學(xué)依據。具體而言，IACUC還應仔細評估涉及腦脊液采集的每個(gè)提案，并考慮以下問(wèn)題：

1.腦脊液采集是否對實(shí)現方案中所述的科學(xué)目標至關(guān)重要？

2.是否有替代方法和侵入性較小的中樞神經(jīng)系統評價(jià)方法（如成像技術(shù)）可供選擇，如果有，是否考慮過(guò)？

3.操作人員是否接受過(guò)適當的培訓并具備足夠的技能？

4.是否將提供適當的圍手術(shù)期麻醉和鎮痛方案？有關(guān)麻醉和鎮痛計劃，應咨詢(xún)實(shí)驗動(dòng)物獸醫。

5.采集的腦脊液體積是否符合動(dòng)物的年齡和體型考慮？

6.腦膜穿刺的次數和頻率是否適合動(dòng)物，以及并發(fā)癥風(fēng)險是否已降到最低？如果多次采集腦脊液為研究的一部分，應明確規定每只動(dòng)物的最大采集次數。

7.術(shù)后監測計劃是否適當？

8.是否考慮了所有可能的術(shù)后并發(fā)癥，并列出了所有合理的干預方法，包括安樂(lè )死？

原文：

Association of Primate Veterinarian :Guidelines for Cerebrospinal Fluid Aspiration for Nonhuman Primates in Biomedical Research.