我們在開(kāi)展實(shí)驗動(dòng)物試驗過(guò)程中，我們經(jīng)常會(huì )提到“試驗終點(diǎn)”和“人道終點(diǎn)”，顧名思義，試驗終點(diǎn)即試驗或研究的終點(diǎn)，是研究者實(shí)現研究的目的后或者試驗結束后，從實(shí)驗動(dòng)物上采集相關(guān)的數據，比如安樂(lè )死后采集動(dòng)物的組織。人道終點(diǎn)，是從人道角度考慮或者出于人道的原因，結束實(shí)驗動(dòng)物的生命，該使命一般由實(shí)驗動(dòng)物獸醫給研究者建議，主導及監督人道終點(diǎn)的實(shí)施，確保實(shí)驗動(dòng)物的福利。

何為人道終點(diǎn)？

根據Guide，人道終點(diǎn)是預防、終止或減輕實(shí)驗動(dòng)物疼痛或痛苦的干預點(diǎn)。從該表述來(lái)看，人道終點(diǎn)并不是實(shí)驗動(dòng)物的生命終點(diǎn)，如果能夠實(shí)施有效的措施來(lái)減輕或者緩解動(dòng)物的疼痛或痛苦，實(shí)驗動(dòng)物依然可以存活，所以，人道終點(diǎn)不是狹隘的理解為動(dòng)物安樂(lè )死。人道終點(diǎn)的使用也有助于試驗的優(yōu)化，它替代了試驗終點(diǎn)會(huì )導致動(dòng)物無(wú)法緩解或者嚴重的疼痛和痛苦，包括動(dòng)物死亡。

人道終點(diǎn)的考慮因素

人道終點(diǎn)應該具有相關(guān)性和可靠性。對于許多侵入性試驗，試驗于人道終點(diǎn)緊密相連，且應在IACUC方案審查時(shí)謹慎考慮。所有研究均應采用人道終點(diǎn)，通常需要特別考慮的研究包括涉及腫瘤模型、感染性疾病、疫苗繼發(fā)試驗、疼痛模型、創(chuàng )傷模式、單克隆抗體生產(chǎn)、毒理學(xué)評估、器官或系統衰竭和心血管休克模型研究。

PI 對研究的目的和模型的建立都有準確的了解，他應該在動(dòng)物使用方案中明確和解釋研究終點(diǎn)的人道和科學(xué)合理性。然而，人道終點(diǎn)的確定通常具有挑戰性，因為必須權衡多種因素，包括模型、種屬 (有時(shí)是品系或種群)、動(dòng)物健康狀況、研究目標、機構政策、監管要求，以及偶爾相互沖突的科學(xué)文獻。人道終點(diǎn)的確定應涉及 PI、獸醫和IACUC，并應在研究開(kāi)始前盡可能確定。

IACUC在評估方案中合適的終點(diǎn)考慮因素的關(guān)鍵信息，包括人道終點(diǎn)的準確定義（包括評估標準）、動(dòng)物的觀(guān)察頻率、負責評估和識別人道終點(diǎn)的人員的培訓，以及達到人道終點(diǎn)時(shí)所需的反應。對提前安樂(lè )死和瀕死狀態(tài)時(shí)的行為或生理學(xué)定義，以及使用研究特定動(dòng)物的評估記錄，將有助于PI 和IACUC考慮或制定動(dòng)物的建議終點(diǎn)。

當提案新研究或試驗缺乏替代終點(diǎn)信息時(shí)，先開(kāi)展探索性試驗是一個(gè)用來(lái)明確和定義人道終點(diǎn)的有效方法，并在 PI、IACUC和獸醫之間已達成共識。在這類(lèi)試驗期間和之后，應建立與 IACUC的溝通系統。已有許多出版物闡述了人道終點(diǎn)的應用和使用的具體建議。

人道終點(diǎn)的判定標準

根據嚴重程度、持續時(shí)間和對適當治療的效果，適用于大多數動(dòng)物種屬人道終點(diǎn)的臨床體征包括但不限于：

?體重迅速或進(jìn)行性減輕。幼齡或生長(cháng)期動(dòng)物應使用其種屬/品系的典型生長(cháng)圖表、身體狀況評分或與未治療的年齡和性別相同的同類(lèi)動(dòng)物進(jìn)行比較來(lái)評估體重。

?厭食（食欲減退或喪失）或無(wú)法飲水

?虛弱性腹瀉

?脫水/皮膚彈性降低或水腫

?腹部腫大或腹水

?皮炎或其他對治療無(wú)效的疾病

?被毛粗糙蓬亂，弓背

?嗜睡或持續躺臥

?翻正反射喪失或無(wú)法保持平衡

?咳嗽、呼吸困難、流涕、喘氣

?黃疸、發(fā)紺和/或蒼白/貧血

?神經(jīng)系統體征（癲癇發(fā)作、麻痹、輕癱、轉圈/頭部?jì)A斜、失明）

?任何天然孔出血

?暴露潛在肌肉的自誘導創(chuàng )傷

?任何干擾日常活動(dòng)的情況（例如，進(jìn)食或飲水、筑巢、走動(dòng)、消除或正常姿勢運動(dòng)）

?過(guò)度或長(cháng)時(shí)間的體溫過(guò)高或過(guò)低

腫瘤模型試驗中到達終點(diǎn)的其他體征包括但不限于：

?腫瘤負擔大于體重10%。在成年小鼠中，任何一個(gè)維度的腫瘤均不應超過(guò) 20 mm；在成年大鼠中，任何一個(gè)維度的腫瘤均不應超過(guò) 40 mm。

?腫瘤破潰和（或）壞死和（或）感染

?腫瘤妨礙動(dòng)物進(jìn)食或行動(dòng)

人道終點(diǎn)的監測

應制定動(dòng)物監測計劃，在上述任何方面發(fā)生改變之前和之后，適當情況下提供照顧，并在必要時(shí)提高監測水平。周末和節假日的監測或臨床護理可能需要研究人員的參與，以填補動(dòng)物照顧和獸醫人員的工作。除非 ASP 另有規定，研究人員應負責監測并采取適當措施，包括周末和節假日。

應確定負責評價(jià)、記錄保存、通知研究者和（或）獸醫的人員以及負責人道處死的人員。檢查表或評分表可能有助于確保做出適當的觀(guān)察、一致地解釋和適當記錄。

非預期結果

科學(xué)研究的基礎是對新的試驗變量的研究。由于引入高度新穎的變量時(shí)，可能會(huì )出現影響動(dòng)物健康的非預期結果，可能需要對動(dòng)物進(jìn)行更頻繁的監測。GMAs（轉基因動(dòng)物）有潛在的非預期表現型，是加強對非預期結果監測的模型示例。

轉基因動(dòng)物，特別是小鼠和魚(yú)類(lèi)，是重要的動(dòng)物模型，遺傳操作的新方法和組合也在不斷地開(kāi)發(fā)中。無(wú)論基因操作是靶向的還是隨機的，最初結果的表型通常是不可預測的，可能導致預期或非預期的結果，影響動(dòng)物在生命的任何階段的健康或存活。當轉基因動(dòng)物的初始特征表現出對動(dòng)物健康有負面影響時(shí)，應向 IACUC 報告，可能需要更廣泛的分析來(lái)更好地定義表型。

然后，鑒于研究項目的復雜性、對人道終點(diǎn)理解的差異、不同機構對動(dòng)物福利水平的要求，不同的臨床獸醫對人道終點(diǎn)的理解、把握和判斷標準有一定的差異。當然，人道終點(diǎn)不等同于實(shí)驗動(dòng)物生命的終點(diǎn)，及時(shí)終止或者緩解實(shí)驗動(dòng)物的疼痛或痛苦非常重要，這也是實(shí)驗動(dòng)物獸醫日常工作中最重要的職責之一。此外，如何預防實(shí)驗動(dòng)物的疼痛或痛苦，如何避免動(dòng)物到達人道終點(diǎn)狀態(tài)，確保試驗順利到達試驗終點(diǎn)，才應該是我們維護動(dòng)物福利，減少動(dòng)物浪費的更高追求。

參考文獻：

1.Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, NRC, 2011

2.Wendy O Williams and Philippe Baneux, Humane Intervention Points: Refining endpoint terminology to incorporate non-euthanasia intervention options to improve animal welfare and preserve experimental outcomes, SAGE journals, 2022